Juan L. Martínez1(B,E,G), Shayan Khorsandi2(E,F), Robert Sojo2(B,F), Cristina Martínez2(B,F), José A. Martín3(B,G),

Juan R. López-Taylor4(B,G), Thomas D. Fahey5(E), Miguel A. Rivera2(A,C,D,E)

1 Sección de Medicina y Ciencias Aplicadas al Deporte, Instituto Sinaloense del Deporte, Sinaloa, México.

2  Departamento 2 de medicina de la medicina física, de la rehabilitación y de deportes, Facultad de Medicina, universidad de Puerto Rico, San Juan, Puerto Rico.

3 Dept of Physiotherapy, Faculty of Medicine, Universidad San Pablo CEU, Madrid, Spain

4 Instituto de Ciencias Aplicadas a la Actividad Física y al Deporte,Universidad de Guadalajara, Jalisco, México

5 Departamento de la kinesiología, universidad de estado de California, Chico, CA, los E.E.U.U.

Extracto

Introducción y puntería del estudio: La genética desempeña un papel dominante en la determinación de funcionamiento de la resistencia. Examinamos la asociación entre un polimorfismo genético en el lugar geométrico músculo-específico de la cinasa de la creatina (CKMM) y el nivel de funcionamiento de la resistencia (EPL) en corredores de maratón hispánicos de la élite.

Materiales y métodos: Las muestras de la DNA genotyped con éxito a partir de 380 corredores de maratón hispánicos (hombres n = 220; mujeres n=160). Casos (n=190; men=110, women=80) eran acabadoras en el porcentaje superior 3, mientras que los controles (n=190; men=110, women=80) estaban ésos en el porcentaje más bajo 3 de su edad y género respectivos. Los genotipos fueron determinados por la polimerización en cadena y la digestión con el endonuclease de NcoI.

Resultados: Los tres esperaron que los genotipos para el CKMM-NcoI fueran observados en los casos y los controles. Estos genotipos las frecuencias, dentro de cada género, estaban en el equilibrio Robusto-Weinberg (χ2, P≥0.05) y no estaban perceptiblemente (χ2, P> 0.05) diferente entre los géneros. No había diferencia de género (P≥0.05) en las frecuencias alélicas. Los datos reunidos para ambos géneros no revelaron ninguna diferencia significativa en frecuencias del genotipo (P≥0.05) o del alelo (P≥0.05) entre los casos y los controles.

Conclusiones: Estos resultados repliegan los resultados de un estudio anterior en caucásicos (el MED Sci se divierte Exerc. 1997; el 29:1444 - 47) y sugiere que el polimorfismo de CKMM-NcoI no sea un determinante importante del nivel de funcionamiento de la resistencia.

Palabras claves: genética, cromosoma 19, atletas, capacidad aerobia, funcionando

Introducción.

El actual estudio es parte de una investigación más grande tuvo como objetivo la identificación de los genes que contribuían al funcionamiento de la resistencia de la élite en hispanico. Varios estudios apoye una asociación del gene músculo-específico de la cinasa de la creatina (CKMM) con funcionamiento de la resistencia fenotipos relacionados (1-5). El gene de CKMM ha sido trazado a la región q13.2-q13.3 del cromosoma 19 (6). Este gene extiende sobre 17.5 pares del kilobase y contiene 8 exones y 7 intrones (7).

Los informes recientes indican ese solo nucleótido 262 los polimorfismos (SNP) se saben en este gene (8). De estos SNPs una variación de la DNA de A/G, en 3 la ' región sin traducir (9), identificada antes como sitio de la restricción de NcoI (5, 10, 11) ha demostrado una asociación con energía aerobia en el estado sedentario y su respuesta al entrenamiento de la resistencia (4, 5) así como con respuestas corrientes de la economía a una semana 18 5000 m programa de entrenamiento (2).

La cinasa de la creatina (CK) es una enzima abundante adentro músculo esquelético y el corazón (12, 7). El isoform cytosolic del músculo de la enzima es una por lo menos de cuatro subunidades de las CK que se conozcan para su expresión tejido-específica (7, 13, 14). Algunos de los isoenzimas de la cinasa de la creatina sea muscular (CK-MM), cerebro (CK-BB) y dos subunidades mitocondriales (CK-MB) (ubicuo y un sarcomeric) (12). Cada uno se asocia a las regiones particulares de demanda de gran energía dentro del citoplasma de la célula.

La isozima de CKMM genera altas concentraciones del ATP en la región de la miosina dirige (13). Está limitada específicamente a la M-línea de los 15) fragmentos secundarios uno de la miofibrilla (del meromyosin pesado en la vecindad de la ATpasa de la miosina (16), y a la membrana y a las vesículas externas (17) del retículo sarcoplásmico. CKMM desempeña un papel dominante en el homeostasis de la energía de células con intermitentemente necesidades energéticas altas, que fluctúan. La enzima CK cataliza un equilibrio cercano, la reacción sin salida que se asegura de que sea el cociente de ATP/ADP mantenido. La reacción catalizada es Û de MgATP + del Cr polimerización en cadena + MgADP + H. Aunque ésta sea la reacción general para la mayor parte de las CK, CKMM cataliza a transferencia reversible del grupo de N-phosphoryl de la fosfocreatina (polimerización en cadena) al ADP para regenerar ATP (12). Tales reacciones ocurren siempre que la producción del ATP por la fosforilación oxidativa o la glicolisis no empareje las tarifas de utilización del ATP.

El hecho de que CKMM esté expresado en cardiaco y el músculo esquelético y él se asocia a resistencia los fenotipos relacionados con el funcionamiento sugieren un posible relación con funcionamiento de la resistencia. Las punterías del actual trabajo era determinar las frecuencias y el predominio alélicos del genotipo para un solo nucleótido polimorfismo (→ de A G) en ' región sin traducir los 3 del gene de CKMM (9) e investigar la asociación de este polimorfismo genético con el nivel de funcionamiento de la resistencia en una cohorte hispánica amplia.

Métodos

Esta investigación fue diseñada como caso-control estudio. Los temas eran los voluntarios biológico sin relación que compitieron en por lo menos uno del siguiente acontecimientos corrientes interurbanos entre 2004 y 2008: Maratón de Madrid, España; Gran Maratón Pacifico, Mazatlán, México; Maratón internacional de Guadalajara, México; Maratón de Culiacán, México. Valores específicos del género para las características físicas para los casos y los controles se presentan en el cuadro 1.

El proceso del reclutamiento incluyó una entrevista para determinar los criterios siguientes de la exclusión el emparejar y/o de la inclusión: área étnica y geográfica de origen, domicilio, historia de la participación en acontecimientos de la resistencia, enfermedad cardiovascular, enfermedad respiratoria, actividad de la artritis, historia de la enfermedad metabólica, y medicaciones prescritas. Cualquie tema con sabido la historia de cardiovascular, de respiratorio, la artritis, enfermedad metabólica o en la medicación fue excluida de este informe. Temas que divulgaron a incidentes eso afectó negativamente a su raza que el resultado estaba también excluido del estudio. Clasificación sujeta como el caso o el control fue basado en los resultados finales oficiales del acontecimiento.

Casos

Temas (n = 190; men= 110; women=80) eran corredores de maratón hispánicos adultos que acabaron en el 3ro porcentaje superior de su edad y grupo respectivos del género en por lo menos uno de los acontecimientos corrientes interurbanos antedichos. Controles (n = 190; men=110; women=80) eran corredores de maratón hispánicos adultos que acabaron en el 3ro porcentaje más bajo de su edad y género respectivos. Las Comisiones médicas de cada uno de la resistencia los acontecimientos aprobaron el estudio, y el consentimiento informado escrito fue obtenido de todos los temas.

Aislamiento de la DNA

La DNA de Genomic fue purificada de sangre entera por medio de la DNA de Genomic del mago de Promega Kit de la purificación (Promega Corporation, Madison, WI). Brevemente, 20 mililitros de sangre periférica venosa fueron recogidos de cada tema, en los tubos que contenían el EDTA. El primer paso en el procedimiento de la purificación requirió la lisis de los glóbulos rojos así como los glóbulos blancos y sus núcleos. Un paso de la digestión de la ARNasa siguió. Las proteínas celulares fueron quitadas por un paso de la sal-precipitación que dejaba la DNA genomic del peso de molecularidad elevada en la solución. Después, el genomic La DNA era concentrada y desalada por el isopropanol precipitación. Finalmente, la DNA extraída fue rehidratada en el μl 800 de la solución de la rehidratación de la DNA de Promega (Tris-Ácido clorhídrico 10mM (pH 7.4) y EDTA 1mM (pH 8.0)) y almacenado en -80°C (congelador científico 916, Marietta, Ohio de Forma). La concentración y la calidad, según lo evaluado por el cociente de la absorbencia en 280 contra 260 nanómetro, de la DNA fueron determinadas por la espectrofotometría.

Determinación del genotipo

El polimorfismo estudiado (número del sitio de la restricción = 1803285 (8), es una variación de la DNA de A/G en 3 ' región sin traducir (9), identificada antes como sitio de la restricción de NcoI (5, 10, 11). La reacción en cadena de polimerasa (polimerización en cadena) (18) fue realizada en un GeneAmp Sistema 9800 (biosistemas aplicados GeneAmp de la polimerización en cadena 9800, ciudad adoptiva, CA). Las cartillas eran como sigue: 5 ' GTG-CGG-TGG-ACA-CAG-CTG-CCG 3 ' y 5 ' CAG-CTT-GGT-CAA-AGA-CAT-TGA-GG 3 ' (5, 10). El volumen total de la polimerización en cadena era el μL 25 de una mezcla de reacción que contenía la mezcla del amo de Qiagen Taq (Qiagen el inc., Ventura, CA), 0.3 μM de cada uno adelante y al revés cartillas, y 5 - 10 ng de DNA genomic. El protocolo de la amplificación era: 1) un ciclo de desnaturalización en 95°C para el minuto 5; 2) 30 ciclos de desnaturalización en 95°C para 30 s, recociendo en 60°C para 30 s, y extensión en 72°C para 45 s; y 3) un ciclo final del alargamiento de 5 minutos en las medidas preventivas de la contaminación 72°C. fue tomado por la inclusión de la mezcla de reacción de la polimerización en cadena sin la DNA (control negativo) en cada funcionamiento de la amplificación. Después cada amplificación, el producto de la polimerización en cadena fue digerida con 5 U de NcoI. Las condiciones del resumen de la restricción eran ésas recomendado por el fabricante de la enzima (nuevo Inglaterra Biolabs, Ipswich, mA). Los fragmentos resultantes fueron separados por electroforesis horizontal encendido geles 1.5% de la agarosa. Cada gel fue funcionado con para el minuto 60 en 150 mA mientras que está refrigerado en 10°C, manchado con etidio bromuro, y fotografiado debajo de ULTRAVIOLETA transmitida luces usando 2000 un sistema Bio-Rad Gel-Doc. Un punto de ebullición 100 la escala fue utilizada como marcador de la longitud para estimar el tamaño de los fragmentos digeridos de la DNA. El alelo sin El sitio de la restricción de NcoI fue señalado como alelo A (1170 punto de ebullición), mientras que el alelo con el sitio polimórfico de NcoI fue señalado como alelo G (el punto de ebullición 985 y 185).

El acordar a un nuevo redondo de la polimerización en cadena y de genotyping como se describe anteriormente. En caso de una unión mal hecha entre primer y segundo genotyping, la muestra fue resometida a una polimerización en cadena y a un ciclo genotyping. La extracción, el almacenaje, y la gerencia de la DNA, tan bien como la polimerización en cadena y genotyping fueron realizados en el laboratorio de la fisiología y de la genética de ejercicio del departamento de medicina de la medicina física, de la rehabilitación y de deportes en la Facultad de Medicina de la universidad de Puerto Rico, San Juan.

Análisis estadístico

La prueba del Ji-cuadrado de Pearson fue utilizada para examinar diferencias en frecuencias del alelo entre los géneros, casos contra controles y determinar si la distribución del predominio del genotipo diferenció de ésa esperada bajo equilibrio Robusto-Weinberg. El contenido de información del polimorfismo (PIC) y el índice del heterocigoto (h) eran calculados según procedimientos describieron a otra parte (19, 20) los 20) valores del PIC (es un indicador de la probabilidad que un lugar geométrico del marcador es informativo. Se estima de la frecuencia de los heterocigotos que son determinados por el número de alelos del marcador y de sus frecuencias respectivas. H (19) es una medida de probabilidad de la probabilidad que un tema aleatoriamente seleccionado es heterozigótico para cualquier dos alelos en un lugar geométrico dado del gene. Los cocientes de las probabilidades con intervalo de confianza del 95% así como las pruebas del Ji-cuadrado fueron realizados usando el paquete de programas informáticos de Epi Info 3.5.1 (21). Valores de P <0.05 eran considerados estadístico significativo.

Resultados Alelo y frecuencias del genotipo

Los tres genotipos previstos para el CKMM-NcoI el polimorfismo en la ' región sin traducir los 3 fue observado en los casos y los controles (cuadro 2). En ambos los grupos de los casos y de los controles, estas frecuencias del genotipo, dentro de cada género, estaban en Robusto-Weinberg el equilibrio (χ2, P≥0.05) y no era perceptiblemente (χ2, P≥0.05) diferente entre los géneros.

Observado las frecuencias alélicas estaban dentro de la gama de ésos divulgó previamente para los caucásicos (22). En ambos casos y controles el alelo 1170 del punto de ebullición era observado menos con frecuencia. No había diferencia de género (P≥0.05) en las frecuencias alélicas. Los datos reunidos para ambos géneros no revelaron ninguna diferencia significativa en frecuencias del predominio (P≥0.05) o del alelo del genotipo (P≥0.05) entre los casos y los controles.

Grado de polimorfismo

Las medidas observadas del grado de polimorfismo en el sitio polimórfico de CKMM-NcoI para Los casos y los controles se presentan en el cuadro 3. Los valores del PIC y el índice de H estaban dentro de la gama de otros datos publicados para los no-Hispánico (22).

Discusión

El actual estudio determinó las frecuencias y el predominio alélicos del genotipo para un SNP (A/G) en la ' región sin traducir los 3 del gene de CKMM (9) y examinó su asociación con el nivel de funcionamiento de la resistencia en una cohorte hispánica amplia. El encontrar principal del estudio no reveló ninguna diferencia estadística en las frecuencias alélicas y genotípicas observadas del CKMM A/G polimorfismo entre los casos y los controles.

A nuestro conocimiento, el actual estudio representa primera tentativa de examinar la asociación del actual CKMM A/G SNP con el nivel de funcionamiento de la resistencia. Dos publicaciones anteriores (23, 22) habían examinado el mismo marcador de CKMM y su asociación con ¦O2max (22), así como el estado del funcionamiento (23). En un casecontrol diseñe (22) las frecuencias y el genotipo alélicos el predominio para el CKMM SNP fue examinado adentro Temas caucásicos de los varones con un colmo (± 79 4 ml·kilogramo 1·min-1) y bajo (± 30 9 ml·kg-1·min-1) ¦O2max. Los resultados de ese estudio indicaron que el A/G SNP en el gene de CKMM no contribuyó a la clasificación apropiada de temas en estado alto o bajo de ¦O2max. A lo largo de esas líneas, en otro estudio del caso-control (23), la asociación entre el CKMM SNP y el funcionamiento el estado fue examinado en ciclistas profesionales, controles sedentarios, y corredores olímpicos de la clase. No las diferencias estadísticas fueron encontradas para el CKMM SNP predominio entre los tres grupos.

No debemos no hacer caso del hecho que el CKMM A/G SNP ha demostrado asociaciones significativas con ¦O2max (4, 5) y respuestas de funcionamiento de la economía (2) al entrenamiento de la resistencia. En seres humanos, estudios anteriores indique que ¦O2max, un indicador común de la capacidad del ejercicio de la resistencia y correlacionado positivamente con funcionamiento de la resistencia, fue asociado a el CKMM SNP bajo estudio (4, 5). Además, un punto bajo pero acoplamiento genético significativo fue observado estadístico entre el actual CKMM SNP y respuesta de ¦O2max al entrenamiento de la resistencia (4). Ésos el encontrar reveló una asociación constante entre Gene sin traducir de la región A/G SNP de CKMM 3 ' en cierre proximidad y la respuesta del ¦O2max al entrenamiento de la resistencia en adultos sanos biológico sin relación. Otro estudio reciente (2) reveló una asociación estadístico significativa entre el polimorfismo en los 3 ' región sin traducir del gene y de funcionamiento de CKMM respuesta de la economía al entrenamiento de la resistencia.

En conclusión, los resultados del actual estudio ensanchó el alcance de la información que sugiere cómo un gene puede influenciar un fenotipo relacionado con el funcionamiento pero no otro de la resistencia. Funcionamiento de la resistencia así como estado del funcionamiento de la resistencia/llanos son dos fenotipos altamente complejos en los cuales ningún gene importante el efecto todavía se ha identificado. Puede ser afirmado que el CKMM o el cierre por los juegos del gene un papel en la respuesta de la capacidad aerobia al entrenamiento sino a él de la resistencia no vierte la luz con respecto a funcionamiento de la resistencia estado o nivel. La investigación adicional parece autorizada para aclarar tal contención. Finalmente, los actuales resultados no proporcionan la ayuda a la hipótesis del asociación entre polimorfismo de la región A/G del CKMM 3 ' y nivel de funcionamiento sin traducir de la resistencia en nuestra cohorte de hispánico.

Reconocimiento

Apoyado por CRC-RCMI 1P20RR11126, RCMI #G12RR03051, Maratón Pacifico, Maratón de Culiacán, Maratón de Guadalajara, Maratón de popular Madrid.

Referencias

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